Acta Pharmacol Sin：迷迭香酸联合人参皂苷Rg1通过共同抑制COX-2和PD1/PD-L1信号轴抑制结肠癌转移

背景：结直肠癌(CRC)转移是结直肠癌患者死亡的主要原因。结肠癌组织中COX-2和PD-L1表达的升高与肿瘤细胞的远处转移有关。尽管COX-2抑制剂和免疫检查点抑制剂显示出更好的抗肿瘤疗效，但它们的毒性和个体患者的不同治疗效果引起了关注。为了应对这一挑战，寻找能够调节COX-2和PD-1/PD-L1的中药成分至关重要。

研究表明，迷迭香酸(RA)对COX-2具有显著的抑制作用，而人参皂苷Rg1 (GR)具有抑制PD-1/PD-L1结合的潜力。因此，该研究旨在探索RA和GR联合使用是否对CRC具有抗转移作用。

方法：雄性C57BL/6野生型小鼠随机分为6组（n = 10）：对照组、模型组、Cel 25 mg·kg^-1·d^-1组、RA 100 mg·kg^-1·d^-1组、RA 100 mg·kg^-1·d^-1 + GR 100 mg·kg^-1·d^-1组、RA 100 mg·kg^-1·d^-1 + aPD-L1 5 mg·kg^-1·3d^-1组。建立MC38肿瘤异种移植小鼠肺转移模型：采集MC38细胞并重悬于PBS中，除对照组外，其他各组小鼠均静脉注射200μL含有2.4 × 10⁵个MC38细胞的PBS。用异氟烷麻醉小鼠后将其置于Micro-CT系统，CT数据处理软件（Analyze 12.0，PerkinElmer，USA）用于导出收集的图像。四周后，采集外周血、肺、肝、胃和结肠直肠组织。

使用pCas-Puro-U6-Ptgs2-KO质粒构建Ptgs2敲除MC38细胞系（Ptgs2KO MC38）。慢病毒-Puro-CMV-Ptgs2构建过表达的Ptgs2 MC38细胞系（Ptgs2OE MC38）。采用MTT法评估MC38细胞的生存能力；采用transwell迁移试验来评估MC38细胞的迁移能力；使用3D培养系统评估细胞的侵袭性。

ELISA法测定抗PD-1/PD-L1蛋白结合能力；免疫荧光、免疫组化、Western blot与PCR检测COX-2、NWASP、Arp2、Arp3、MYO10、Granzyme B、IFNG等蛋白表达及基因转录水平。

结果：RA(50、100、150 μM)和COX-2抑制剂塞来昔布(1、3、9 μM)对MC38细胞的迁移和侵袭具有浓度依赖性。实验进一步证明，RA和塞来昔布通过干扰COX-2-MYO10信号轴和抑制丝状足的产生，在体外和体内抑制MC38肿瘤的转移。

在MC38肿瘤异种移植小鼠中，RA给药可显著减少Micro CT扫描检测到的肺转移灶数量；RA联合抑制PD-1和PD-L1结合的GR进一步抑制结肠癌肺转移。与COX-2抑制剂和免疫检查点抑制剂相比，RA和GR在不破坏肝脏、胃和结肠组织结构的情况下表现出更好的安全性。

结论：RA和GR联合用药有效地抑制了癌症的转移，降低了内脏毒性，为临床中药在保持其疗效的同时降低肿瘤毒性提供了新的见解。

原始出处：

Liu H, Deng R, Zhu CW, et al. Rosmarinic acid in combination with ginsenoside Rg1 suppresses colon cancer metastasis via co-inhition of COX-2 and PD1/PD-L1 signaling axis [published online ahead of print, 2023 Sep 25]. Acta Pharmacol Sin. 2023;10.1038/s41401-023-01158-8. doi:10.1038/s41401-023-01158-8